Pengaruh Variasi Suhu dan Konsentrasi Metanol terhadap Ekspresi Proglargine Secara Ekstraseluler oleh Pichia pastoris X33 Rekombinan

Diabetes melitus merupakan masalah kesehatan global yang membutuhkan terapi insulin yang efektif. Insulin glargine, sebagai analog insulin long-acting, menjanjikan dalam pengobatan diabetes, namun optimasi produksinya masih menjadi tantangan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh variasi suhu dan konsentrasi metanol terhadap ekspresi proglargine secara ekstraseluler oleh Pichia pastoris X33 rekombinan. Penelitian ini merupakan penelitian deskriptif yang dilaksanakan pada Februari - Desember 2024 di Laboratorium Balai Bioteknologi, Badan Riset dan Inovasi Nasional (BRIN) Gedung 630, KST BJ Habibie Serpong, Tangerang Selatan. Variasi optimasi ekspresi fermentasi yang dilakukan berupa variasi suhu (28°C dan 30°C) dan variasi konsentrasi metanol (1%, 2%, dan 6%). Protein hasil ekspresi dimurnikan menggunakan kromatografi penukar kation HiTrap™ SP HF yang berisi resin sulfopropil (SP Sepharose High Flow). Ekspresi protein dianalisis menggunakan spektrofotometer dan SDS-PAGE. Hasil optimasi ekspresi protein proglargine terbaik diperoleh pada induksi ekspresi protein di suhu 28°C dengan konsentrasi metanol 2%. Analisis SDS-PAGE menunjukkan bahwa pada kondisi ekspresi protein optimum diperoleh berat protein proglargine sesuai dengan yang diharapkan (7kDa).